全自動(dòng)熒光細(xì)胞分析儀是一款基于圖像法檢測(cè)，配合多熒光通道，通過采集圖像中的細(xì)胞信息，進(jìn)行定量分析。它將熒光顯微成像與統(tǒng)計(jì)學(xué)群體分析結(jié)合于一身，既能提供細(xì)胞群的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，又可以獲得單個(gè)細(xì)胞的圖像，從而提供細(xì)胞形態(tài)學(xué)信息。*的圖像采集系統(tǒng)同時(shí)產(chǎn)生明場(chǎng)以及四張熒光圖像，讓實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為直觀。
全自動(dòng)熒光細(xì)胞分析儀的應(yīng)用舉例：
(一).在脂肪干細(xì)胞研究中的應(yīng)用
1.細(xì)胞濃度、活率計(jì)數(shù)
全自動(dòng)熒光細(xì)胞分析儀可同時(shí)進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)及AOPI兩種方法計(jì)數(shù)，確保不同狀態(tài)的脂肪干細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確性。對(duì)于狀態(tài)差的樣本，臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)的細(xì)胞圖片中，出現(xiàn)許多臺(tái)盼藍(lán)染色非常淺的類似空泡狀的細(xì)胞，這些細(xì)胞對(duì)樣本死活的判斷常常會(huì)比較主觀、容易誤判。
AOPI方法可以很好解決這個(gè)問題。所以建議對(duì)于不同狀態(tài)的的樣本可根據(jù)需求采用兩種方法計(jì)數(shù)結(jié)果正準(zhǔn)確。
2.脂肪干細(xì)胞細(xì)胞表型鑒定
細(xì)胞密度、生長(zhǎng)代數(shù)10代以內(nèi)生物學(xué)特性基本保持不變，3代以上細(xì)胞表型標(biāo)志物表達(dá)量下降，所以脂肪干細(xì)胞表型鑒定是非常重要的。主要包括細(xì)胞形態(tài)及CD分子標(biāo)志物的鑒定。
對(duì)于脂肪干細(xì)胞表型鑒定，全自動(dòng)熒光細(xì)胞分析儀不僅可以為大家提供清晰可靠的細(xì)胞圖片，同時(shí)可以結(jié)合FCSexpress類流式分析軟件得到可靠的類流式數(shù)據(jù)分析，從而滿足大家的需求。
(二).在免疫治療領(lǐng)域的應(yīng)用
免疫療法，如CAR-T治療包括從病人收集外周血單核細(xì)胞(PBMC)，然后分離所需的T細(xì)胞亞群，通過基因改造產(chǎn)生工程CAR-T細(xì)胞，CAR-T細(xì)胞在體外大規(guī)模擴(kuò)增后再回輸?shù)交颊?。全自?dòng)熒光細(xì)胞分析儀系統(tǒng)可以對(duì)整個(gè)CAR-T生產(chǎn)過程中細(xì)胞濃度，活率進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并且符合GMP的要求。
1.AO/PI雙熒光法檢測(cè)活率：
吖啶橙和碘化丙啶是可以和細(xì)胞核核酸結(jié)合的熒光染料。AO可以穿透活細(xì)胞和死細(xì)胞對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色并發(fā)出綠色熒光，PI進(jìn)入死細(xì)胞對(duì)細(xì)胞和進(jìn)行染色并發(fā)出紅色熒光。
因此AO/PI為細(xì)胞核染料，可以準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞與死細(xì)胞，而且可以排除雜質(zhì)或者非特異細(xì)胞的干擾，進(jìn)行精準(zhǔn)的濃度活率檢測(cè)。
2.細(xì)胞毒性檢測(cè)
對(duì)靶標(biāo)細(xì)胞用無毒的無放射性的鈣黃綠素進(jìn)行標(biāo)記(或者GFP轉(zhuǎn)染標(biāo)記)，我們可以觀察CAR-T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷效應(yīng)?；畹哪[瘤細(xì)胞會(huì)含有鈣黃綠素或者GFP，死的腫瘤細(xì)胞不含有鈣黃綠素或者GFP。
Hoechst33342被用來染色所有的細(xì)胞(包含T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞)，PI用來染色所有的死細(xì)胞(包含T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞)。這種染色策略可以讓我們對(duì)細(xì)胞進(jìn)行精準(zhǔn)的區(qū)分。
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